F-7000荧光分光光度计基本操作规程

1、开机：

（1）开启计算机。

（2）开启仪器主机电源。按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色。

2、（1）双击桌面图标（FL Solution 2.1 for F-7000）。主机自行初始化，扫描界面自动进入。

（2）初始化结束后，须预热15-20分钟

3、参数设置

点击右侧图标，出现以下界面：

4、Wavelength scan：已知荧光物质最适激发波长和发射波长的情况下测荧光物质荧光强度，如不同溶剂环境对荧光物质荧光强度的影响或者猝灭剂对荧光物质荧光猝灭作用

Time Scan:测荧光强度随时间的变化

Photometry:光度测定，定量实验

3-D Scan:未知荧光物质最适激发波长和发射波长，通过测三维荧光，可得最适激发波长和最适发射波长

本实验室常用为Wavelength scan 和3-D Scan

Wavelength scan参数设置:

5、主要参数选项包括：

①  选择扫描模式“Scan Mode”：Emission/Excitation/Synchronous（发射光谱、激发光谱和同步荧光）。

②  选择数据模式“Data Mode”：Fluorescence/Phosphprescence/Luminescence(荧光测量、磷光测量、化学发光)。

③  设定波长扫描范围。

A、     扫描荧光激发光谱(Excitation)：设置最适激发波长

B、     扫描荧光发射光谱(Emission)：设置发射波长范围（包含最适发射波长）

！！Attention：激发光终止与起始波长差不小于10nm。

④  选择仪器响应时间“Response”（一般选Auto）。

⑤  选择光闸控制“□Shutter Control”打√，以使仪器在光谱扫描时自动开启，而其他时间关闭。

⑥  选择“Report”设定输出数据信息、仪器采集数据的步长（通常选0.2nm）及输出数据的起始和终止波长（Data Start/End）。

（4）参数设置好后，点击“确定”。

6、设置文件存储路径

（1）点击扫描界面右侧“Sample”，如图4。

图4  Sample选项的界面

（2）样品命名“Sample name”。

（3）选中“□Auto File”， 打√。可以自动保存原始文件和TXT格式文本文档数据。

（4）参数设置好后，点击“OK”。

7、扫描测试

（1）放入样品池

将制备的样品加入样品池中（最好用移液枪），样品体积在1/2-2/3之间（不宜过多），然后打开光谱仪上方的盖子将样品池放入其中，注意样品池的横线面向自己，最后盖上光谱仪的盖子。

（1） 点击扫描界面右侧“Measure”，窗口在线出现扫描谱图。

3-D Scan参数设置：

测三维荧光除PMT Voltage外均采用以上参数设置

Time Scan参数设置：

设置最适激发波长和发射波长，输入适当的扫瞄时间，测试荧光物质荧光强度随时间的变化关系

8、数据处理

打开测试文件，右键单击出现以下界面：

选择Properties,出现以下界面：

在Output选择Use Microsoft Excel,将Include data list 和Include peak table前面打勾，设置输出数据起始和终止波长，点击确定。

在菜单栏点击Data

选择Report,将数据输出至excel，然后将数据文件复制到origin里作图。

三维荧光数据以及Time Scan数据处理类似以上操作。

三维荧光：最适激发和发射波长：

打开测试文件，在菜单栏选择View,出现以下界面：

点击Peak Talbe,出现以下界面：

在最右侧Data列表下，找出最大值所对应的激发波长和发射波长，及为最适激发波长和发射波长

9、关机顺序（逆开机顺序实施操作）：

  （1）关闭运行软件FL Solution 2.1 for F-7000，弹出窗口，如图6。

  （2）选中“○Close the lamp，then close the monitor windows？”，打“⊙”。